Cristo en la Cruz, en el momento del vencimiento, con la Virgen y San Juan, y al pie de la Cruz, la Magdalena. Probablemente originalmente por encima de la Anunciación, en el retablo del Colegio de Doña María. Esta pintura y la Anunciación son las más amplias las dos de la serie.
Ya en Santo Domingo el Antiguo, el artista había relacionado con sensatez juntos en la composición de los dos cuadros centrales del altar mayor, la Asunción y la Trinidad. Una vez más, no hay esta relación de la composición de las dos pinturas, pero también hay algo más en esta puesta en común de los temas de dos tan diversos pero íntimamente relacionados con la recepción de la Virgen del Espíritu Santo, y Cristo está dando por el Espíritu Santo. Uno de los sujetos representa uno de los gozos de la Virgen, y la otra incorpora una de sus penas. Cada cuadro se divide horizontalmente en tres. La figura de Cristo de la Expiración es una continuación hacia arriba de la zona central de la Anunciación, con las llamas y la paloma, la figura del arcángel Gabriel tiene su contraparte en la figura de San Juan y la Virgen de la Alegría aparece por encima de la Virgen de la pena.
Esta pintura de la crucifixión es una de las grandes interpretaciones del tema en la pintura y, casi inevitablemente, trae a la mente dos crucifixiones otros grandes, Grünewald del Altar Isenheim y de Giotto de la Capilla de la Arena. El Greco ha introducido más de los símbolos que contiene emociones espirituales: los ángeles con los brazos extendidos pidiendo a gritos que rodea el cuerpo de Cristo - extrañamente recordando la pintura de Giotto - y la figura notable del ángel a los pies de la Cruz.